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\chapter{Zusammenfassung}
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Ziel dieser Arbeit war es, eine Häminbindung von \ac{RTE1}, einem negativen Regulator der Ethylenantwort in \ac{A. thaliana} nachzuweisen und zu quantifizieren. Es konnten verschiedene Assays zum Nachweis und zur Quantifizierung der Häminbindung etabliert werden.
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Hierfür wurde der \ac{RTE1}-kodierende Genabschnitt in einen aus pET-15b abgeleiteten Vektor kloniert, in den \ac{E. coli} Stamm BL21-Gold (DE) transformiert und in diesem expremiert. Das rekombinant hergestellte \ac{RTE1} konnte dann über einen His-Tag affinitätschromatographisch gereinigt werden.
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Zum Nachweis einer Häminbindung kam zunächst ein Häminagaroseassay zum Einsatz. Hämin ist hierbei an einer Agarosematrix immobilisiert und kann mit \ac{RTE1} in Lösung interagieren. Die Elution von gebundenem \ac{RTE1} erfolgte denaturierend oder unter Zugabe von freiem Hämin. In beiden Fällen ließ sich eine Bindung nachweisen.
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Darüberhinaus wurden Messungen im UV-Vis-Spektrophotometer durchgeführt. \ac{RTE1} mit gebundenem Hämin zeigt hier einen Absorptionsanstieg im Soret-Band bei gleichzeitiger Blauverschiebung, wobei letztere für die Bestimmung eines K$_\text{d}$-Wertes herangezogen wurde. Im Fluoreszenzspektrometer führt die Zugabe von Hämin zu einem Quench der Tryptophanfluoreszenz, welcher ebenfalls zur K$_\text{d}$-Bestimmung ausgewertet wurde. Beide Methoden ergaben für pH 7,5 einen K$_\text{d}$ von \SI[seperr]{7,24(223)}{\micro\Molar} (UV-Vis) bzw. \SI[seperr]{4,90(23)}{\micro\Molar} (Fluoreszenz). Es zeigte sich auch, dass die Bindungsaffinität bei saurem pH deutlich geringer ist, als bei physiologischem oder leicht alkalischen pH.
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Schließlich konnte mit einer \ac{CD}-Spektroskopie gezeigt werden, dass die Zugabe von Hämin eine Veränderung der Sekundärstruktur hin zu deutlich höherem \textalpha-helikalem Strukturanteil zur Folge hat.
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Die etablierten Bindungsassays können in zukünftigen Versuchen Hinweise -- beispielsweise zur erfolgreichen Renaturierung von denaturierend gereinigtem \ac{RTE1} -- liefern.
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